ACREDITACIÓN DEL LABORATORIO DE ADN DE LA GUARDIA CIVIL

El Departamento de Biología del Servicio de Criminalística tiene encomendada la elaboración de Informes Periciales que precisan análisis del ADN. Estos análisis se realizan sobre las evidencias que las Unidades de Policía Judicial de la Guardia Civil y las Autoridades Judiciales remiten a dicho Servicio.

Debido a la repercusión que el ADN tiene en los asuntos judiciales (homicidios, agresiones sexuales, lesiones, robos, etc.), en los que cada vez más se convierte en el único elemento de prueba, las solicitudes de Informes Periciales han sufrido un incremento significativo. Ejemplos de esta repercusión son los asesinatos de Sonia Carabantes y Rocío Wanninkhof, el programa Fénix de identificación de cadáveres y desaparecidos, la identificación en catástrofes como el accidente de tren de Chinchilla (Albacete), etc.

Para brindar un mejor servicio a la sociedad, el Laboratorio de ADN trata de transmitir su confianza a los ciudadanos a través del fruto específico de su trabajo, es decir, el propio Informe Pericial. De hecho, la Entidad Nacional de Acreditación – ENAC- ha venido a garantizar la competencia técnica de los análisis de ADN mediante el alcance que a continuación se indica, en el marco de la norma ISO 17025:

“Identificación y análisis genético - forense de tejidos y fluidos humanos” (383/LE/776)

El número 25 de la revista “Actualidad de la Acreditación” que publica ENAC (octubre de 2003) recoge este evento otorgándole una gran transcendencia. El siguiente número (diciembre) vuelve a hacer hincapié en el mismo asunto a raíz de la entrega oficial del certificado por parte del Presidente de ENAC al Director General de la Guardia Civil, certificado que éste pone a su vez en manos del Coronel Jefe del Servicio de Criminalística.

Al Laboratorio de ADN se le reconoce, pues, su competencia técnica en los análisis de ADN encaminados a la identificación humana mediante ADN nuclear (autosómico y cromosoma Y) y ADN mitocondrial. No interviene en análisis referidos a la salud, ya que este tipo de análisis son exclusivos de centros hospitalarios, de laboratorios de análisis clínicos y de áreas de investigación específicas de algunas universidades. El análisis que se realizada en nuestro Laboratorio va referido a la identificación humana, es decir, a la obtención del perfil genético, o “huella genética”, sobre segmentos no codificantes.

Este servicio que se pone a disposición de los ciudadanos, el de la acreditación del laboratorio, se complementa con el que se ofrece con las bases de datos de ADN, Fénix y ADNIC, que buscan un fin eminentemente social en el primer caso, y el de proteger el libre ejercicio de los derechos y libertades y garantizar la seguridad ciudadana (art. 104 de la Constitución), en ambos.

Estas bases de datos son fuentes de gran satisfacción. Identificar al autor de un homicidio o de una agresión sexual lo es siempre, y lo es aún más la eliminación de la sospecha sobre la participación de una persona inocente.

Generalidades sobre el ADN

El ácido desoxirribonucleico (ADN) es el material genético que se encuentra en todas las células del cuerpo humano. Puede almacenarse en diferentes zonas de la célula. El ADN nuclear se encuentra en el núcleo, y se hereda mitad de la madre y mitad del padre, con excepción del ADN presente en el cromosoma Y masculino, que sólo se hereda por línea paterna.

El ADN mitocondrial está presente en los orgánulos de la célula conocidos como mitocondrias y sólo se hereda por línea materna. Aunque estos dos tipos de ADN se diferencian por su origen y función, estructuralmente son similares. Ambos pueden aportar valiosas pruebas en las investigaciones. El proceso conocido como análisis de ADN comienza con el examen del material genético recuperado de muestras diminutas tomadas de tejidos humanos o fluidos corporales, como la sangre o el semen; así se obtiene una "huella" o un "perfil", sinónimos en relación con este tema. El perfil resultante es una serie de códigos alfanuméricos que se pueden comparar fácilmente con otros de referencia o ya conocidos, y posteriormente archivar en un ordenador. Si se estudian suficientes zonas del ADN, el perfil final puede ser relativamente único para cada individuo, o corresponder a la línea paterna o materna.

ADN nuclear

El ADN del núcleo es ideal para identificar a las personas. Puede decirse, con matices, que llega al 100%. Se identifica el ADN nuclear del resto biológico objeto de la investigación con el de una persona en concreto, o se identifican como de una misma persona los restos recogidos en situaciones y épocas diferentes. Es una herramienta extraordinaria. Y todavía más, en ausencia de la persona a la que pertenecen los restos, puede estudiarse para la identificación, el ADN nuclear de los supuestos padres o hijos, es decir, se procede a establecer paternidades o filiaciones, tan comunes en el ámbito civil.

Esto puede ser así debido a que en una sola célula viene a existir el equivalente a una escalera de caracol (ADN) de unos tres mil millones de peldaños (pares de bases: A-T, G-C).

En la actualidad, el análisis de ADN es relativamente simple. El proceso se compone de las siguientes etapas: la recogida de evidencias en el lugar del delito, así como de las víctimas y los sospechosos; la extracción, purificación y cuantificación del ADN de todas las muestras obtenidas de las evidencias; la copia o amplificación de segmentos cortos de ADN; la visualización de los fragmentos; el análisis de los resultados y su transformación en códigos alfanuméricos; la comparación visual o mediante ordenador de los códigos obtenidos.

Todos los sistemas de ADN a que se hace referencia en un análisis forense se concentran en las zonas no codificantes del genoma. Esto significa que no incluyen información acerca de las características físicas o sicológicas, las enfermedades o la propensión a las mismas.

Un método llamado reacción en cadena de la polimerasa (“Polymerase Chain Reaction", PCR) se utiliza para amplificar o copiar regiones del ADN, lo que permite obtener perfiles a partir de cantidades mínimas de material genético. El proceso de la PCR revolucionó hasta tal punto la esfera de la biología molecular que su inventor, el Dr. Kary Mullis, recibió en el año 1.995 el Premio Nóbel por su descubrimiento. Mediante la utilización de este proceso se producen millones de copias de segmentos seleccionados de regiones variables de ADN, que se pueden utilizar para obtener perfiles.

La principal ventaja del método PCR es que hace posible el análisis con una cantidad pequeña de ADN. Asimismo, la técnica de la amplificación es rápida y extremadamente útil para analizar el ADN a partir de material humano degradado encontrado en muestras biológicas antiguas o parcialmente deterioradas. Por este motivo, las pruebas basadas en la PCR se han convertido en un método estándar utilizado en la práctica totalidad de los laboratorios de criminalística.

La técnica preferida actualmente para el análisis de ADN humano se basa en el examen mediante PCR de los loci de ADN microsatélite (STR) (es decir, secuencias repetidas de ADN en las que las unidades de repetición polimórficas se componen generalmente de dos a cuatro pares de bases). Se ha observado que las repeticiones de secuencias tetra y pentanucleótidas son las más estables para el análisis mediante PCR. Estas STR pueden amplificarse sin problemas incluso a partir de cantidades inferiores al nanogramo de ADN. La separación de los fragmentos amplificados se lleva a cabo mediante electroforesis sobre capilar. La amplificación simultánea de loci STR mediante la técnica de PCR multiplex y la detección automática de los fragmentos de ADN hacen posible un sistema de análisis rápido y sensible que permite aprovechar al máximo las muestras y tiene un alto poder de discriminación.

Si en lugar de fijarnos en el ADN nuclear en general (autosómico), nos fijamos en una parte exclusiva del varón y que determina su sexo, entonces es que estamos estudiando el cromosoma Y.

Una parte del cromosoma Y que no cambia de generación en generación sirve incluso de vía para conocer el árbol genealógico del hombre moderno. Las muestras genéticas estudiadas de hombres procedentes de distintas partes de la Tierra permiten deducir que la ausencia de variación se debe a la existencia de un ancestro común reciente (el "Adán cromosoma Y"). Peter Underhill de la Universidad de Stanford, tras estudiar 1007 hombres de 22 áreas geográficas distintas sitúa el ancestro común de varones en hace sólo 59.000 años.

ADN mitocondrial

El ADN que está en las mitocondrias de las células (ADN mitocondrial), aporta otro tipo de información para la criminalística. Es una escalera (ADN) de 16569 peldaños (pares de base: A-T, G-C). Se transmite sólo vía materna, y es igual en todo el tronco familiar. No identifica una sola persona (el grupo de personas emparentados vía materna tiene el mismo ADN mitocondrial) pero, en ausencia de la persona a la que pertenecen los restos, permite establecer relaciones familiares muy útiles para la identificación genética de restos biológicos.

En función del tipo de prueba, y en el marco de los análisis genéticos forenses, la utilización del ADN-mt como procedimiento previo al estudio de ADN nuclear presenta ventajas importantes. Debido al gran número de copias de ADN-mt (más de 1.000) presente en cada célula, este tipo de análisis tiene un alto grado de sensibilidad.

El estudio de ADN-mt puede emplearse en los casos en que se presuponga que la cantidad de ADN nuclear sea muy pequeña o nula. Por ejemplo, en pelos, huesos y dientes la cantidad de ADN nuclear suele ser escasa, especialmente en muestras antiguas o degradadas. Por tanto, la obtención de la secuencia de ADN mitocondrial permite establecer una relación de parentesco. No obstante es necesario realizar un estudio de ADN nuclear para obtener una identificación plena. No es útil el estudio de ADN-mt cuando se sospeche la existencia de mezclas de fluidos orgánicos. Asimismo los perfiles de ADN nuclear no pueden ser comparados con las secuencias de ADN-mt.

Una característica que hay que tener en cuenta para el uso forense de los análisis del ADN-mt es que, además de los hermanos, todos los parientes por vía materna muestran la misma secuencia de ADN-mt, lo que significa que las personas de este grupo no pueden ser identificadas por separado. Por esta razón, los vínculos familiares pueden comprobarse muy fácilmente.

Un posible inconveniente de esta técnica es su complejidad, en particular a causa de una eventual heteroplasmia, y su extrema sensibilidad a la contaminación. Por otra parte, resulta cara y lenta, y sus resultados tienen menos poder discriminatorio que los del análisis del ADN nuclear.

Las variaciones de determinadas regiones del ADN mitocondrial, al acumularse a un ritmo fijo, permiten sostener que la primera mujer moderna (la "Eva mitocondrial" de los "homo sapiens") vivió hace unos 150.000 años. En concordancia con los yacimientos arqueológicos, tendría la piel oscura (“Eva negra”). Estos resultados son concordantes con otros obtenidos del estudio de las lenguas en el árbol filogenético de las principales etnias humanas, que intuyen una lengua común hacia el mismo periodo de tiempo. Como señalaba el Nobel Walter Gilbert, todo esto no sería compatible con los modelos en los cuales el "homo sapiens" surge simultáneamente en varios puntos de la Tierra reemplazando al hombre de Neanderthal.

En definitiva …

… con el estudio del ADN nuclear pueden identificarse personas de las que se obtiene su propio “código de barras”, o perfil genético; además permite establecer paternidades o filiaciones, muy útiles en ausencia de la persona a identificar; incluso puede establecerse un tronco común vía paterna (cromosoma Y), lo cual constituye una gran ayuda cuando existe mezcla de perfiles genéticos, por ejemplo, en una mancha.

Con el estudio del ADN mitocondrial se conoce un tronco familiar común emparentado vía materna; en ausencia de la persona a la que pertenecen los restos, puede estudiarse el de los familiares correspondientes.

Las BASES nitrogenadas del ADN son: Adenina (A), Guanina (G), Timina (T), Citosina (C).
El ADN responde al modelo doble hélice o de dos cadenas propuesto en 1953 por WATSON y CRIK.
Estas cadenas se unen entre sí por sus BASES (A-T, G-C). Su estructura, de doble hélice o de dos cadenas, es parecida a la de una escalera en espiral en la que cada par de bases forma los escalones.

El ADN nuclear está contenido entre los 46 CROMOSOMAS del núcleo de las células humanas nucleadas. Estos cromosomas sólo son visibles durante la división de la célula correspondiente (mitosis).
Con el fondo de color marrón aparecen los 46 cromosomas de una mujer (el par sexual XX, el par 23).
Con el fondo de color verde aparecen los 46 cromosomas de un hombre (el par sexual XY, el par 23).
El ADN nuclear, como portador de la información genética, se transmite de padres a hijos de acuerdo con las Leyes de Mendel; por eso la “mitad” del ADN de una persona procede del padre y la otra “mitad” de la madre biológicos. De esta forma los cromosomas se agrupan en 23 pares de cromosomas homólogos (en cada par uno procedería del padre y otro de la madre)
El ADN que se estudia en identificación es no codificante (no son los genes –unos 35.000- que determinan, por ejemplo, el aspecto general de un organismo, como el color del pelo, o de los ojos, etc.).